Tipo de trabalho: Tese de Doutorado

Instituição: Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp/SP)

Ano: 2006

Autor: Natalia Cristina Verza Ferreira

Resumo:

O seqüenciamento de ESTs (etiquetas de seqüência expressa) e a sua organização em bancos de dados constituem poderosas ferramentas para identificação de novos genes. Nós criamos um banco de ESTs chamado MAIZESTdb, que contém 227.431 ESTs vindas de mais de 30 órgãos e tecidos de milho diferentes, 30.531 seqüenciados a partir de bibliotecas construídas com mRNA de endosperma em nosso laboratório. A análise deste banco levou à identificação de 4.032 transcritos preferencialmente expressos no endosperma, e a sua anotação revelou uma ampla variedade de prováveis genes novos envolvidos no desenvolvimento e no metabolismo do endosperma. O banco MAIZESTdb foi então utilizado na identificação de fatores de transcrição (TFs), especialmente TFs preferencialmente expressos no endosperma. Foram identificados 1.233 TFs expressos em milho, 414 dos quais expressos no endosperma, e 113 TFs preferencialmente expressos no endosperma, conjunto este que representa 9.2% dos TFs expressos em milho identificados neste trabalho, e que possivelmente contém reguladores importantes dos processos de especificação celular e desenvolvimento. Esta é a maior coleção de fatores de transcrição já reportada para este tecido. Um novo membro da família NAC, chamado de ESN-1 (Endosperm Specific NAM 1), teve seu perfil de expressão caracterizado. Seu pico de expressão se dá entre 20 e 25 DAP, e ele apresenta expressão preferencial no endosperma. Seu promotor foi clonado, seqüenciado e analisado quanto aos possíveis elementos CIS regulatórios; foram encontrados elementos relacionados a endosperma-especificidade, elementos relacionados à regulação por ABA e GAs e elementos conservados em promotores de α-amilases, indicando uma possível relação deste gene com o processo de transição entre a maturação e a germinação da semente. Ensaios de expressão transitória com o promotor do gene ESN-1 revelaram que sua expressão está dirigida à camada de aleurona do endosperma de milho, o que constitui mais uma evidência de sua possível função na regulação de genes relacionados aos processos de maturação e germinação da semente.